雞白介素17 Elisa檢測 Elisa實驗
雞白介素17ELISA試劑盒資料:
規(guī) 格 (48T/96T)
樣品類(lèi)型 血清、血漿(jiāng)、細胞培養上清等樣品類(lèi)型
檢(jiǎn)測(cè)方法 酶聯免疫法
特 異 性 公司ELISA試劑(jì)盒具有較(jiào)高的靈敏度和出色的特異性
交叉反應 由於(yú)當前的酶聯免疫科學技術和知識有限,現有技術不可能完成藥物檢測(cè)的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此,交叉反應可能仍然存在
樣(yàng) 本 量 50-100 μL
實驗時(shí)間(jiān) 1–4.5h
儲(chǔ)存條(tiáo)件 2-8°C
儲存方法:可以存儲在2 - 8°C長達1個月(專家建議:4°C恒溫保存,酶免試劑盒實驗效果更佳)。對於長期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗闆在密封鋁箔袋,避免潮濕
有 效 期 6 months
雞白介素17ELISA試劑盒的原理
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶标記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶标記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢标本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與液體中的其他物質分開。再加入酶标記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與标本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物後,底物被酶催化成爲有色産物,産物的量與标本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由於(yú)酶的催化效率很高,間接地放大瞭(le)免疫反應的結果,使測定方法達到很高的敏感度。
雞白介素17ELISA試劑盒的類型
ELISA可用於測定抗原,也可用於測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶标記的抗原或抗體,稱爲"結合物"(conjugate);(3)酶反應的底物。根據試劑的來源和标本的情況以及檢測的具體條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。用於臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:
雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1) 将特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2) 加受檢标本,保溫反應。标本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體複合物。洗滌除去其他未結合物質。
3) 加酶标抗體,保溫反應。固相免疫複合物上的抗原與酶标抗體結合。*洗滌未結合的酶标抗體。此時固相載體上帶有的酶量與标本中受檢抗原的量相關。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成爲有色産物。通過比色,測知标本中抗原的量。在臨床檢驗中,此法适用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。隻要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源爲抗血清,包被和酶标用的抗體分别取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分别用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以将受檢标本和酶标抗體一起保溫反應,作一步檢測。
在一步法測定中,當标本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分别和固相抗體及酶标抗體結合,而不再形成"夾心複合物"。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象,此時反應後顯色的吸光值(位於抗原過剩帶上)與标準曲線(位於抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結果将低於實際的含量,這種現象被稱爲鈎狀效應(hook effect),因爲标準曲線到達高峰後呈鈎狀彎落。鈎狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定标本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應注意可測範圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鈎狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分别包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的幹擾。RF是一種自身抗體,多爲IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清标本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶标抗體結合,表現出假陽性反應。採用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由於去除瞭Fc段,從而消除RF的幹擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列爲這類試劑的一項考核指标。
雙抗體夾心法适用於測定二價或二價以上的大分子抗原,但不适用於測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。
雞白介素17ELISA試劑盒樣品要求
·客戶(hù)需提供待檢測(cè)抗體和包被用抗原。
·檢測(cè)的樣本爲細胞培養上清、人和動(dòng)物的血清、血漿。
·樣本收集後(hòu)應立即-20℃保存,若長(zhǎng)期保存應-70℃。
·樣本量的要求:若一個指标做複孔檢測(cè)應不少於(yú)250ul,做單孔檢測(cè)應不少於(yú)120ul。建 議若客戶樣本量充足提供500ul以上。
·客戶的樣本收集後,立即按要求保存,切忌反複凍(dòng)融。外地客戶郵寄需要用幹冰運輸。郵寄前請與溝通確(què)認。