l 本試劑盒用於(yú)體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中猴白細胞介素6(IL-6)的含量。
l 有效期:6個月
l 保存條件:2-8℃
l 本試劑盒僅供體外研究使用,不用於(yú)臨床診斷(duàn)
實驗原理
試劑盒採(cǎi)用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被猴白細胞介素6(IL-6)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育並(bìng)*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的猴白細胞介素6(IL-6)呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
IL-6多少錢,猴白細胞介素6elisa試劑盒廠家性能:
1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小於(yú)1号标準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.990。
2. 特異(yì)性:不與其它細(xì)胞因子反應。
3. 重複性:闆内、闆間變(biàn)異系數均小於(yú)10%。
ELISA試劑盒結果判斷與分析
1、儀器值:於(yú)波長(zhǎng)450nm的酶标儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值爲縱坐标(Y),相應的待測(cè)物質标準品濃度爲橫(héng)坐标(X),做得相應的曲線,樣品的待測(cè)物質含量可根據其OD值由标準曲線換算出相應的濃度。
ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1)血清-----操作過(guò)程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和内毒素的試管。收集血液後,1000×g離心10分鍾将血清和紅(hóng)細胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於(yú)檢測(cè)。1000×g離心30分鍾去除顆粒。
3)細胞上清液---1000×g離(lí)心10分鍾去除顆(kē)粒和聚合物。
4)組織勻漿(jiāng)-----将組織加入适量生理鹽水搗(dǎo)碎。1000×g離心10分鍾,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應将其分成小部分-70 ℃保存,避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並(bìng)確(què)保樣品均勻地充分解凍。
IL-6多少錢,猴白細胞介素6elisa試劑盒廠家操作步驟
1)使用前,将所有試劑(jì)充分混勻。不要使液體産(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,産(chǎn)生加樣上的誤差。
2)根據待測(cè)樣品數量加上标準品的數量決定所需的闆條數。每個标準品和空白孔建議做複孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用複孔的盡量做複孔。标本用标本稀釋液1:1稀釋後加入50ul於(yú)反應孔内。
3)加入稀釋好後的标準品50ul於(yú)反應孔、加入待測(cè)樣品50ul於(yú)反應孔内。立即加入50ul的生物素标記的抗體。蓋上膜闆,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4)甩去孔内液體,每孔加滿洗滌(dí)液,振蕩(dàng)30秒,甩去洗滌(dí)液,用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗闆機洗滌(dí),洗滌(dí)次數增加一次。
5)每孔加入80ul的親和鏈(liàn)酶素-HRP,輕輕振蕩(dàng)混勻,37℃溫育30分鍾。
6)甩去孔内液體,每孔加滿洗滌(dí)液,振蕩(dàng)30秒,甩去洗滌(dí)液,用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗闆機洗滌(dí),洗滌(dí)次數增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,輕(qīng)輕(qīng)振蕩(dàng)混勻,37℃溫育10分鍾。避免光照。
8)取出酶标闆,迅速加入50ul終止液,加入終止液後(hòu)應立即測(cè)定結果。
9)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
試劑的準備
1)标準品:标準品的系列稀釋應在實驗時準備(bèi),不能儲(chǔ)存。稀釋前将标準品振蕩混勻。
2)洗滌(dí)緩沖(chōng)液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
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