IL-33,BIM大鼠白細胞介素33酶聯免疫試劑盒廠家

l 本試劑盒用於(yú)體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中大鼠白細胞介素33（IL-33）的含量。

l 有效期：6個月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用於(yú)臨床診斷(duàn)

實驗原理

試劑盒採(cǎi)用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠白細胞介素33（IL-33）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體，經過溫育並(bìng)*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的大鼠白細胞介素33（IL-33）呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存：

1）細胞培養上清：

适用於(yú)檢測(cè)體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鍾，收集上清。

2）細胞：

用PBS反複洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104-106/ml 左右，通過反複凍融，使細胞破壞並(bìng)放出細胞内成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。

3）血清：

在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離(lí)心15分鍾，取上清待測(cè)。

4）血漿：

應根據标本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作爲抗凝劑(jì)，混合後(hòu)靜置10-20 分鍾後(hòu)，以1000×g離心15分鍾，收集上清。

5）體液：

包括胸腹水、腦(nǎo)脊液，分泌物等。使用不含熱原和内毒素的離(lí)心管收集，以1000×g離(lí)心15分鍾，收集上清。

6.）組織标本：

切取組織标本，稱(chēng)取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀将标本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鍾，收集上清進行檢測(cè)。

樣(yàng)品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

7）保存：

   如果樣品不能立即檢測，應将其分裝，-70 ℃保存，避免反複冷凍。保存過程中如出現沉澱，應再次離心。血液标本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並(bìng)確(què)保樣品均勻地充分解凍。

IL-33,BIM大鼠白細胞介素33酶聯免疫試劑盒廠家操作步驟：

1）取出試(shì)劑(jì)盒，室溫（20-25℃）放置30分鍾。

2）分組：取出96孔闆，根據待測(cè)樣品數量加上标準品的數量決定所需的闆條數，把剩餘的闆條繼續冷藏處(chù)理。分别設标準品組（6個濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。

3）标準品的稀釋：準備(bèi)小試管6 隻，依次編(biān)好号碼，先在各小試管中加入标準品稀釋液100ul，然後取原濃度标準品100ul加入一隻已編(biān)好号的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三隻試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四隻試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五隻試管中，充分混勻；然後在該試管中取100ul，棄掉。第六隻試管作爲0 号标準品。

注：爲減少實驗誤差，保證準確(què)性，建議設置複(fù)孔。

4）加樣：依照标準品的順序分别加入50ul的标準品溶液於(yú)空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其餘微孔中先加樣品40ul然後再加生物素标記的抗體10ul。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻。

5）溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫(wēn)育30 分鍾。

6）洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30 秒棄去，如此重複(fù)5 次，拍幹。

7）加酶标溶液：标準品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶标溶液（空白對(duì)照孔除外）。

8）溫育：酶标闆用封闆紙密封後(hòu)，放入濕盒内於(yú)37℃恒溫孵育1小時。

9）洗闆：用稀釋後的洗滌(dí)液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶标闆5次，用吸水紙*拍幹(gàn)。

10）顯色：各孔加入顯色劑(jì)A液50ul後(hòu)，再加入顯色劑(jì)B液50ul。

11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鍾(zhōng)，加入50ul終止液。

12）讀(dú)闆：在450nm波長(zhǎng)讀(dú)取各孔的OD值。

注：讀闆時必須拭幹闆底殘(cán)留的液體和手指痕迹，讀闆時間控制在終止反應後的30分鍾内，以免影響準確(què)性。

IL-33,BIM大鼠白細胞介素33酶聯免疫試劑盒廠家數據計算：

  以标準物的濃度爲橫(héng)坐标，OD值爲縱坐标，在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度；或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸(guī)方程式，将樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，即爲樣品的實際濃度。

注意事項：

1）實(shí)驗操作中必須使用一次性吸頭(tóu)，避免交叉污染。

2）加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免*孔與zui後一孔間的時間間隔過大，否則将會導緻不同的預孵育時間，從(cóng)而影響實驗的準確(què)性以及重複性。

3）孵育：嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間(jiān)和溫度進行。

反應時間的控制：加入底物後請定時觀(guān)察反應孔的顔色變(biàn)化，如果顔色較深，請提前加入終止液終止反應。

4）建議實驗前預測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高，應對(duì)樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。

5）建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做标準曲線，試用幾個标本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商，如果因運輸過程導緻試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔(dān)産(chǎn)品本身以外的任何損失。