IL-27試劑盒說明書

人白介素-27（IL-27）ELISA試劑盒

 （用於(yú)血清、血漿(jiāng)、細胞培養上清液和其它生物體液内）

原理

本實驗採用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 IL-27 單(dān)抗包被於(yú)酶标闆上，标準品和樣品中的 IL-27與單抗結合，加入生物素化的抗人IL-27，形成免疫複合物連接在闆上，辣根過氧化物酶标記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍色，zui後(hòu)加終止液硫酸，在450nm處測OD值，IL-27濃度與OD值成正比，可通過繪制标準曲線求出标本中IL-27濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

準備試劑與收集血樣

1. 收集标本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反複凍融。

2. 标準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成4000pg/ml的溶液。設标準管8管，每管加入标本稀釋液300ul。在*管中加入4000pg/ml的标準品溶液300ul混勻後用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反複作對(duì)倍稀釋，從(cóng)第七管中吸出300ul棄去。第八管爲空白對照。

3. 10×标本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測程序

1. 加樣(yàng)：每孔各加入标準品或待測(cè)樣(yàng)品100ul，将反應闆充分混勻後置37℃120分鍾。

2. 洗闆：用洗滌(dí)液将反應(yīng)闆充分洗滌(dí)4-6次，向濾紙上印幹。

3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。将反應闆充分混勻後置37℃60分鍾。

4. 洗闆：同前。

5. 每孔加酶标抗體工作液100ul。将反應闆置37℃30分鍾。

6. 洗闆：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鍾。

8. 每孔加入100ul終止液混勻。

9. 30分鍾内用酶标儀在450nm處測吸光值。

結果計算與判斷

1. 所有OD值都應減除空白值後(hòu)再行計(jì)算。

2. 以标準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0 pg/ml爲橫坐标，OD值爲縱坐标，在坐标紙上作圖(tú)，畫(huà)出标準曲線。

3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應IL-27含量。

試劑盒性能

  1.   靈敏度：zui小的IL-27 檢測濃度小於15pg/ml。

2. 特異性：可同時檢測重組或天然的人IL-27。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

3. 重複性：闆内、闆見變(biàn)異系數均小於(yú)10％。

注意事項

  1.   以上标準孔及待測樣品均建議做複(fù)孔，每次測(cè)定應同時做标準曲線。

 2.   洗滌過程很關鍵。洗滌(dí)不充分将導(dǎo)緻度誤差及OD值錯誤地升高。

  3.   闆條開(kāi)封後(hòu)剩餘闆條要再封好，保持闆條幹燥。

  4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

 5.   本試劑盒僅用於(yú)科研，不能用於(yú)臨床診斷(duàn)！