小鼠脂聯素(ADP/Acrp30)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍： 96T
3μg/L -120μg/L
使用目的：
本試劑盒用於測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中脂聯素(ADP/Acrp30)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中小鼠脂聯素(ADP/Acrp30)水平。用純化的小鼠脂聯素(ADP/Acrp30)抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂聯(ADP/Acrp30)，再與HRP 标記的脂聯素(ADP/Acrp30)抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的脂聯素(ADP/Acrp30)呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過标準曲線計算樣品中小鼠脂聯素(ADP/Acrp30)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶标試劑 6ml×1 瓶 8 标準品（240μg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被闆 12 孔×8 條 9 标準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封闆膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
标本要求
1．标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120μg/L 5 号标準品 150μl 的原倍标準品加入150μl 标準品稀釋液
60μg/L 4 号标準品 150μl 的5 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
30μg/L 3 号标準品 150μl 的4 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
15μg/L 2 号标準品 150μl 的3 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
7.5μg/L 1 号标準品 150μl 的2 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
2. 加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5 倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30 分鍾。
4. 配液：将30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒後棄去，如此重複5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液後15 分鍾以内進行。
計算
以标準物的濃度爲橫坐标，OD 值爲縱坐标，在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的OD 值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與OD 值計算出标準曲線的直線回歸方程式，将樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鍾後方可使用，酶标包被闆開封後如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本OD 值大於标準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書爲準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月 |
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