本試劑盒僅供研究使用。
植物L-蘋果酸試劑盒檢測範圍： 96T
3ng/L - 80ng/L
植物L-蘋果酸試劑盒使用目的：
本試劑盒用於(yú)測(cè)定植物組織，細胞及其它相關樣本中L-蘋果酸（L-MA）含量。
植物L-蘋果酸試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中植物L-蘋果酸（L-MA）水平。用純(chún)化的植物L-蘋
果酸（L-MA）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入L-蘋(píng)果酸
（L-MA），再與HRP 标記(jì)的L-蘋果酸（L-MA）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經
過*洗滌(dí)後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉
化成zui終的黃(huáng)色。顔色的深淺和樣品中的植物L-蘋果酸（L-MA）呈正相關(guān)。用酶标儀在450nm
波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過标準曲線計算樣品中植物L-蘋果酸（L-MA）濃度。
植物L-蘋果酸試劑盒組成
1 30 倍濃(nóng)縮洗滌(dí)液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶标試(shì)劑(jì) 6ml×1 瓶 8 标準品（160ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被闆 12 孔×8 條(tiáo) 9 标準品稀釋(shì)液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋(shì)液 6ml×1 瓶 10 說明書(shū) 1 份
5 顯(xiǎn)色劑(jì)A 液 6ml×1 瓶 11 封闆膜 2 張
6 顯色劑(jì)B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
植物L-蘋果酸試劑盒标本要求
1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存，但應避免反複凍(dòng)融
2．不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
植物L-蘋果酸試劑盒操作步驟
1. 标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
80ng/L 5 号标準(zhǔn)品 150μl 的原倍标準(zhǔn)品加入150μl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
40ng/L 4 号标準(zhǔn)品 150μl 的5 号标準(zhǔn)品加入150μl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
20ng/L 3 号标準(zhǔn)品 150μl 的4 号标準(zhǔn)品加入150μl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
10ng/L 2 号标準(zhǔn)品 150μl 的3 号标準(zhǔn)品加入150μl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
5ng/L 1 号标準(zhǔn)品 150μl 的2 号标準(zhǔn)品加入150μl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
2. 加樣：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）、标準孔、
待測(cè)樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然後再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5 倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡
量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫(wēn)育30 分鍾。
4. 配液：将30 倍濃縮洗滌(dí)液用蒸餾水30 倍稀釋後備(bèi)用
5. 洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹(gàn)，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30 秒後棄去，如此
重複5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì)50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑(jì)A50μl，再加入顯色劑(jì)B50μl，輕輕震蕩(dàng)混勻，37℃避光顯色
15 分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍(lán)色立轉黃(huáng)色）。
11. 測(cè)定：以空白空調零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應在加終止
液後15 分鍾以内進行。
植物L-蘋果酸試劑盒計算
以标準物的濃度爲橫(héng)坐标，OD 值爲縱坐标，在坐标紙上繪(huì)出标準曲線，根據樣品的
OD 值由标準曲線查出相應的濃(nóng)度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃(nóng)度與OD 值計(jì)算出标
準曲線的直線回歸(guī)方程式，将樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即爲樣品的實際濃度。
植物L-蘋果酸試劑盒注意事項
1．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未
用完，闆條(tiáo)應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鍾内，如标本數量多，推薦(jiàn)使用排槍(qiāng)加樣。
4． 請每次測(cè)定的同時做标準曲線，做複(fù)孔。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本OD 值
大於(yú)标準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測(cè)定，計
算時請(qǐng)zui後(hòu)乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。
9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。
植物L-蘋果酸試劑盒保存條件及有效期
1．試(shì)劑(jì)盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月 |
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