免疫組化操作中問題分析及解決辦法總結

上海恒遠生物科技有限公司不僅從事酶聯免疫試劑盒的研究與開發，我司對免疫組化也涉及其中，並(bìng)且多次試驗，累計瞭(le)很多今年經驗，本章小編就技術文章中爲大家具體分析關於免疫組化操作中，遇到的問題及解決辦法，歡迎閱讀賞析。

問答一：染色過強
原因及相關解決方法
a 抗體濃度過(guò)高或孵育時間過(guò)長(zhǎng) 降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過(guò)一夜
b 孵育溫(wēn)度過(guò)高超過(guò)37度 一般在室溫(wēn)20-28度
c DAB顯色時間過長(zhǎng)或濃度過高 顯色時間不超過5-12分鍾，以顯微鏡下觀(guān)察爲準 

問答二：非特異性背景染色
原因及相關解決方法
a 操作過程中沖洗不充分： 每步沖(chōng)洗3次每次5分鍾(zhōng)
b 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷(duàn) ：可再配置新鮮3%H2O2封閉(bì)孵育時間延長(zhǎng)
c 組織中含内原性生物素：正常非免疫動物血清再封閉
d 血清蛋白封閉不充分：延長血清蛋白封閉時間

問(wèn)答三：”染色弱
原因及相關解決方法 
a 抗體濃度過(guò)低、孵育時間(jiān)過(guò)短：提高抗體濃度、孵育時間(jiān)不能少 於(yú)60分鍾
b 試劑超過有效使用時間： 應更換試劑
c 操作中添加試劑時緩沖(chōng)液未瀝幹(gàn) ：每步滴加試劑前瀝幹(gàn)切片中多餘的緩沖(chōng)液
使試劑(jì)稀釋 （應防止切片幹(gàn)燥）
d 室溫太低 ：低於(yú)15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鍾或4 度冰箱過(guò)一夜
e 蛋白封閉過度：封閉不要超過12分鍾

問答四：染色陰性
原因及相關解決方法 
a 操作步驟錯誤：應重試設陽性對照
b 組織中無抗原：設陽性對照以驗證試驗結果
c 一抗與二抗種屬連(lián)接錯(cuò)誤：仔細確定一抗二抗種屬無誤

以上問答都是我司在實際操作過程中所遇到的的實際問題解答，確(què)保實驗順利，上海恒遠生物科技有限公司竭誠(chéng)爲您提供服務。

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