每個ELISA試驗都要做标準曲線，所以經常有客戶咨詢對於标準曲線的吸光值具體有什麽要求，多大範圍比較合？有些人是标曲中吸光值範圍在0-1.1072，經驗豐(fēng)富的科研者都建議不要超過(guò)1，濃度太大瞭(le)要稀釋。那麽該(gāi)如何稀釋，稀釋瞭(le)不就不是标曲上的那個濃度值瞭(le)嗎？
一、依據郎伯比爾定律，在0.2~0.8吸光度值與濃度具有線性關系，盡量在這個(gè)範(fàn)圍内。
二、在标準曲線的制作中，選擇不同濃度的标準樣品進行試驗，測(cè)定其吸光值。直到他們的相關(guān)度不是很好之前都是可以的。相關(guān)度是0.999以上。所以一般情況(kuàng)下，吸光值在1左右能能夠(gòu)達(dá)到相關度較好的水平！
三、得看你的待測(cè)的樣品的不同濃度的吸光光度值，大緻的落在什麽範(fàn)圍（用的标準曲線的方法是不适合待測(cè)樣品，有沒有沉底或者其他的不正常的現象），樣品的濃度需要提前摸索摸索，範(fàn)圍拉大（如：6.25、12.5、25、50、100、200、400、600、800、1000、2000等）確(què)定好實驗所需要的濃度範圍，就是坐标曲線瞭(le)。的建議就是：做3組平行樣（也包括樣品），這樣線性關(guān)系會(huì)更好。
四、稀釋相對(duì)而言比較(jiào)容易。如配1000μg/ml的樣品，可以通過其稀釋成800、600、400.具體的如取1000的濃度4ml加入溶劑（水等）1ml可以得到800μg/ml依次類推。
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