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WB實驗新手笨問題之“實驗注意事項”

  • 發布日期:2015-09-02      浏覽次數:2992
    • 免疫印迹(immunoblotting)又稱蛋白質印迹(Western blotting),它是根據抗原抗體的特異性結合檢測複雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由於(yú)免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現已成爲蛋白分析的一種常規技術。免疫印迹常用於(yú)鑒定某種蛋白,並(bìng)能對蛋白進行定性和半定量分析。

      凝膠遷移或電(diàn)泳遷移率實驗(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一種研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用的技術,可用於(yú)定性和定量分析。這一技術zui初用於(yú)研究DNA結合蛋白,目前已用於(yú)研究RNA結合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

      注意事項:

      western blot中轉移在膜上的蛋白處於(yú)變(biàn)性狀态,空間結構改變(biàn),因此那些識别空間表位的抗體不能用於(yú)western blot檢測。這種情況可以将表達目的蛋白的細胞或細胞裂解液中的所有蛋白物素化,再用酶标記親和素進行western blot。實驗中取膠和膜需帶手套。