ELISA酶聯免疫吸附實驗之競争法測抗體

酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是将抗原抗體反應的特異性和酶的催化作用相結合而發展起來的一種免疫标記技術，既可用於組織、細胞内抗原的檢測，又可用於體 液中抗原抗體的檢測。根據檢測方法的不同，可将酶聯法分爲雙抗體夾心法、間接法、競争法、捕獲法和其他ELISA，今天就讓恒遠來爲您講解ELISA酶聯免疫吸附實驗之競争法。
競争法
既可用於抗原半抗原的定量測定，也可用於測定抗體。以抗原競争法爲例，将已知抗體吸附於固相載體，加一定量已知酶标抗原及待測抗原，使兩者 競争與固相抗體結合，經洗滌，zui後結合於固相抗體上的酶标抗原與待測抗原含量呈負相關。步驟如下：
（1）已知抗體包被酶标闆，4℃隔夜。
（2）測定管内加一定量酶标抗原和待檢樣品，對照管内隻加相同量酶标抗原。溫育，洗滌。
（3）分别於測定管、對照管内加一定量底物顯色。
（4）用酶标儀測定對照管、測定管内OD值，用空白調零。通過對照管與測定管OD值之 差，計算标本中待測抗原含量。
進行ELISA操作時應注意以下幾點：
①實驗室溫度應控制在18℃～25℃；
②加樣須準確，同一樣本設立對照管、測定管各兩孔，取其平均值；
③嚴格控制溫 育反應溫度及時間，洗滌應充分；
④ 結果判定應以儀器爲準，肉眼僅作參考。
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