ELISA試劑盒保溫

在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應，即加标本和加酶結合物後。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱爲溫育，有人稱之爲孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。
ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合隻在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法爲例，加入闆孔中的标本，其中的抗原並不是都有均等的和固相抗結 合的機會，隻有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其後加入的酶标記抗體與固相抗 原的結合也同樣如此。這就是爲什麽ELISA反應總是需要一定時間的溫育。
溫育常採用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合适溫度。在建立ELISA方法作反應 動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1～2小時，産物的生成可達。爲加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜 採用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更爲*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜，以形成zui多的沉澱。但因所需時間太長，在ELISA試劑盒中一般不予 採用。
保溫的方式除有的ELISA儀器附有特制的電熱塊外，一般均採用水浴，可将ELISA試劑盒闆置於水浴箱中，ELISA闆底應貼著水面，使溫度迅速平 衡。爲避免蒸發，闆上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋闆孔，此時可讓反應闆漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA試劑盒應放在濕盒内，濕盒要選用傳 熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui後将ELISA闆放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度，特别是在氣溫較低的時候更應如此。 無論是水浴還是濕盒溫育，反應闆均不宜疊放，以保證各闆的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴格限制在規定的範圍内，标準室溫溫度是指 20～25℃，但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時，ELISA試劑盒隻要平置於操作台上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準 確。爲保證這一點，一個人操作時，一次不宜多於兩塊闆同時測定。

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