分析檢測中繪制标準曲線目的是可以根據标準曲線查出待測物質的含量，所以标曲的制定是實驗室工作中必bi不可少的一環。那麽問題來瞭(le)，做标準曲線真的那麽簡單嗎？您所做的标準曲線真的做好瞭(le)嗎?導緻标準曲線彎曲的原因是什麽呢？RSD值、線性相關系數和線性方程如何？線性好與不好分别是由於(yú)哪些原因造成的？是儀器、标液，還是配制的問題？接下來恒遠生物爲您揭曉答案！
一、前期測定時注意：
1.儀器校驗好。
2.移取液體體積要精確(què)，保證迅速準確(què)，盡可能用一根移液管；爲減小人爲所帶(dài)來的誤差，同一種液體需由同一個人操作；
3.保證标準品的純(chún)度，所用标準品最好是新打開的，純(chún)度較(jiào)高的固體或溶液，防止污染；
4.容器要保證潔淨；
5.根據(jù)标準品理化性質注意加樣的先後(hòu)順序；
6.如果要測(cè)OD值，應保證測(cè)前各管液體(tǐ)充分混勻；
7.若還是有某個(gè)點(diǎn)誤差較大，應舍棄。
另外：
1.樣品的濃度等指标是根據标準曲線計算出來的，所以首先要把做标準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事情，否則後(hòu)面的實驗結果将無從(cóng)談起。
2.設置标準曲線樣品的标準濃度範圍要有一個比較大的跨度，並(bìng)且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在标準曲線濃度範圍之内，包括上限和下限。而對於(yú)呈s型的标準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的範圍内。
3.最好採(cǎi)用倍比稀釋法配制标準曲線中的标準樣品濃度，這樣能夠(gòu)保證标準樣品的濃度不會出現較大的偏離。
4.檢測(cè)标準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確(què)性。
5.标準曲線的樣品數一般爲7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6.做出的标準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變(biàn)動，但一般來說，相關系數r至少要大於(yú)0.98，對於(yú)有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。
二、分光光度法繪(huì)制标準曲線所遇問題(tí)？
1.單色光純度不夠
問題(tí)：标準曲線上端向下彎(wān)曲。
措施：光度法中要求在最大吸收峰處測(cè)定吸光度，光度計的有效譜帶寬度越窄越好，有利於(yú)獲得純度高的單色光。
2.比色皿的厚度或光學(xué)性能不一緻(zhì)
如果裝試劑空白液的比色皿較其它比色皿薄或對(duì)光的吸收和反射少一些，則曲線的延線與縱坐标相交；反之，與橫(héng)坐标相交。
3.顯色反應和反應條(tiáo)件的問題(tí)
當顯色反應的靈敏度不高時，被測(cè)物低於(yú)某一濃度就不能顯色，當濃度不同時，溶液對光的吸收、散射的程度不同，低濃度段往往彎曲，加上濃度高時部分膠體顆粒的聚沉，緻使測(cè)定的吸光度降低，曲線上端向下彎曲。
4.操作上的原因
問題：褪色反應，顯色溶液的顔色不穩定、易褪色，若比色時間超過(guò)瞭(le)穩定時間，标準系列中高濃度溶液顔色減褪，緻使曲線上端向下彎曲。
措施：控制好顯色劑(jì)的加入時間(jiān)，可以每加3份，停3～3min，再加上3份，依次進行，以使每支比色管的顯色時間(jiān)相近。
5.幹擾物質的影響
标準曲線繪制完畢(bì)瞭(le)，該如何檢驗？
标準曲線的檢驗是實際操作中最大的難點(diǎn)，也是工作中誤區和争議最多的話題瞭(le)！
先來瞭(le)解下最重要的三大檢(jiǎn)驗項目：
1.精密度檢驗
标準曲線的精密度檢驗：精密度檢驗就是看試驗點(diǎn)距離拟合的直線的距離有無異常，所以也稱(chēng)線性檢驗（拟合檢驗），需用F檢驗，P<0.05作爲線性檢驗合格的标準。
2.截距檢驗
3.斜率檢驗
标準曲線的截距檢驗和斜率檢驗分别考察Y=a+bX中a和b與0的統計學差異，a與0有差别說明有試劑(jì)空白或系統誤差，而b若與0沒差别說明儀器的靈敏度根本達(dá)不到分析要求。
标準曲線的檢驗應該是線性檢驗結合失拟檢驗，以及殘(cán)差的正态性檢驗結合才是統計學上比較完備(bèi)的。
要想繪制出合格的标準曲線、使用好标準曲線，實屬不易，所以必須将以上各個(gè)方面的條件都考慮進去，即對(duì)标準曲線的繪制也實行質量控制，隻有這樣, 才能得出理想的标準曲線。
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