ELISA實驗結果OD值爲何偏低？

ELISA實驗是一個非常嚴謹、極其考驗操作者技巧和經驗的實驗，檢測(cè)結果數值低、标準曲線梯度差、背景值高、變(biàn)異系數大等諸多問題也是兵家常事。有很多客戶向我們咨詢，ELISA實驗結果數據總是偏低，不知道是什麽問題。恒遠生物就爲大家總結一下具體原因，一起來看看吧！




一、整體OD值偏低或無信号：

1.試劑盒組分失活

相應對(duì)策：使用新的試劑(jì)盒，按照說明書要求保存試劑(jì)盒

2.試劑盒組分未平衡

相應對(duì)策：試劑盒每個(gè)組分都需要平衡至室溫後進行實驗

3.試劑混用或混合不充分

相應對(duì)策：保證使用試劑(jì)盒内完整一套試劑(jì)進行實驗，保證溶液充分混合

4.洗液被污染

相應對策：配制新的洗液

5.洗滌液浸泡時間過久或洗闆次數過多

相應對(duì)策：按照說明書的要求進(jìn)行操作

6.孵育時間不充分

相應對(duì)策：保證充足的孵育時間(jiān)

7.孵育溫度不穩定

相應對(duì)策：檢查恒溫箱，確(què)保孵育溫度穩定

8.生物su化抗體或HRP酶結合物不足

相應對(duì)策：保證濃縮液取量準確(què)且稀釋完

9.生物su化抗體或酶結合物稀釋不正確或步驟颠倒

相應對(duì)策：按照說明書的步驟和要求進(jìn)行操作

10. 未加終止液

相應對(duì)策：反應結束時，確(què)保每孔加入終止液終止反應

11.終止後未及時讀闆

相應對(duì)策：終止液終止反應後需要在10min内進行讀(dú)闆操作

12.酶标儀設置錯誤

相應對(duì)策：在酶标儀上檢查波長(zhǎng)和濾光片設置




二、标曲線性佳但樣本OD值偏低

1.标準品部分降解

相應對策：按照說明書推薦方式保存标準品。開封後的标準品應以高濃度用EP管分裝凍(dòng)存，保存於(yú)-20℃，半個月内使用有效。

2.标準品複溶不當

相應對(duì)策：打開前将标準品短暫離心，檢查複(fù)溶後是否有未溶解的物質

3.标準品稀釋不正確

相應對(duì)策：按照說明書要求，保證按正確(què)倍比梯度稀釋




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