使用目的：
本試劑盒用於測定大鼠血清，血漿(jiāng)及相關(guān)液體樣本中氧化三甲胺(TMAO)含量。
實驗原理
本試劑(jì)盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中大鼠氧化三甲胺(TMAO)水平。用純化的大鼠氧化三甲胺(TMAO)抗體(tǐ)包被微孔闆，制成固相抗體(tǐ)，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入氧化三甲胺(TMAO)，再與HRP标記的氧化三甲胺(TMAO)抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成終的黃(huáng)色。顔色的深淺和樣品中的氧化三甲胺(TMAO)呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中大鼠氧化三甲胺(TMAO)濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶标試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 标準品（80ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶标包被闆 | 12孔×8條 | 9 | 标準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封闆膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
标本要求
1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢(jiǎn)測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
40ng/L | 5号标準品 | 150μl的原倍标準品加入150μl标準品稀釋液 |
20ng/L | 4号标準品 | 150μl的5号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
10ng/L | 3号标準品 | 150μl的4号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
5ng/L | 2号标準品 | 150μl的3号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
2.5ng/L | 1号标準品 | 150μl的2号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
2. 加樣：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣(yàng)50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋(shì)液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄(qì)去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
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