使用目的：
本試劑盒用於測定人血清、血漿(jiāng)及相關(guān)液體樣本中抗類固醇生成細胞抗體(SCA)表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定标本中人抗類固醇生成細胞抗體(SCA)表達。用純化的抗原包被微孔闆，制成固相抗原，可與樣品中抗類固醇生成細胞抗體(SCA)相結合，經洗滌(dí)除去未結合的抗體和其他成分後(hòu)再與HRP标記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶标抗原複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成終的黃(huáng)色。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定标本中人抗類固醇生成細胞抗體(SCA)的存在與否。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶标試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶标包被闆 | 12孔×8條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封闆膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
标本要求
1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢(jiǎn)測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 編(biān)号：将樣品對(duì)應微孔按序編(biān)号，每闆應設陰性對(duì)照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）
2. 加樣：分别在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄(qì)去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
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