谷胱甘肽ELISA測定實驗完整攻略

簡介：

GSH的測(cè)定實驗可以用於(yú)：（1）檢測(cè)藥品中GSH的存在以及含量；（2）GSH具有廣譜解毒作用，不僅可用於(yú)藥物，更可作爲功能性食品的基料，在延緩衰老、增強免疫力、抗腫瘤等功能性食品廣泛應用




一、材料準備




1.  包被液：0.05 mol/l（pH9.6）碳酸鹽緩沖(chōng)液：Na2CO3 0.159 g，NaHCO3 0.294 g，用蒸餾水溶解後(hòu)，定容至100 ml。




2.  PBS-T洗滌(dí)液：0.01mol/ pH7.4磷酸鹽-氯化鈉緩沖(chōng)液：NaCl 8.0 g，KH2PO4 0.2 g，Na2HPO4·12H2O 2.9 g，KCl 0.2 g，吐溫-20 0.5 ml，用蒸餾水溶解後，定容至1000 ml。




3.  底物溶液3，3’，5,5‘-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）貯存液及應(yīng)用液：

（1）0.1 mol/l pH6.8 PBS：Na2HPO4·12H2O 1.09 g，NaH2PO4·H2O 6.05 g，蒸餾水溶解後(hòu)定容至500 ml，4℃保存備(bèi)用。

（2）TMB貯備(bèi)液：TMB 60 mg 溶於(yú)10 ml 二甲基亞砜（DMSO）中4℃保存備(bèi)用。

（3）TMB應用液：臨(lín)用前取0.1 mol/l pH6.0 PBS 10 ml，TMB貯備(bèi)液100 ul，30%H2O2 15 ul 混勻即可。




二、實驗步驟




1.  抗體(tǐ)包被

（1）抗體用包被液稀釋至20 ug/ml，加入聚苯乙烯反應闆中每孔100 ul，加蓋(gài)後放4℃過(guò)夜。

（2）傾去孔内液體，加入洗滌(dí)液後靜置3 min，傾盡洗滌(dí)液，重複(fù)洗滌(dí)3次。

（3）将反應闆口在吸水紙上，以除盡(jǐn)液體(tǐ)。




2.  封閉(bì)：每孔加入200 ul封閉(bì)液，37℃孵育60 min，然後洗滌(dí)3次。




3.  加入待測(cè)血清，37℃溫育1~2 h，洗滌3次。用稀釋液作對照孔，标準曲線的制備(bèi)是用不容稀釋度的純GST-π。




4.  加酶标抗體：按要求稀釋抗GST-π-IgG-HRP，每孔100 ul，37℃溫育1 h，然後洗滌(dí)5次，扣在吸水紙上吸幹(gàn)水分。




5.  顯色：加入TMB應用液，置室溫(wēn)反應15~30 min，加入50 ul 2 mol/l H2SO4，穩(wěn)定3~5 min，即可比色。




6.  比色：用酶标儀，以PBS-T孔爲對照，波長(zhǎng)450 nm，測(cè)各孔光吸收度（A），查标準曲線，即可測(cè)得GST-π含量。




參考文獻：




1.【文獻(xiàn)标題(tí)】Tissue engineered artificial liver model based on viscoelastic hyaluronan-collagen hydrogel and the effect of EGCG intervention on ALD

2.【文獻(xiàn)标題(tí)】Analysis of the effect of probucol-mecobalamin tablets combination on oxidative stress in patients with diabetic peripheral neuropathy