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ELISA實驗試劑解析

  • 發布日期:2022-06-21      浏覽次數:1764
    • 在ELISA實驗中有三個(gè)必要的試劑(jì):免疫吸附劑(jì)、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑(jì)盒包含以下各組分:

      (1)已包被抗原或抗體(tǐ)的固相載體(tǐ)(免疫吸附劑(jì));

      (2)酶标記(jì)的抗原或抗體(結(jié)合物);

      (3)酶的底物;

      (4)陰性對照品和陽性對照品(定性測(cè)定中),參(cān)考标準品和控制血清(定量測(cè)定中);

      (5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及标本的稀釋液;

      (6)洗滌液;

      (7)酶反應終止液。


      1.免疫吸附劑

        已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)幹(gàn)燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試盒,僅供應包被用抗原或抗體,檢測(cè)人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。

      2.固相載體

        固相載體在ELISA測(cè)定過程中作爲吸附劑和容器,不參(cān)與化學反應。可作ELISA中載體的材料很多,常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體或蛋白質抗原吸附其上後仍保留原來的免疫學活性,加之它的價格低廉,所以被普遍採用。聚苯乙烯爲塑料,可制成各種形式。


        ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定闆、小珠和小試管。以微量滴定闆爲常用,專用於(yú)EILSA的産品稱爲ELISA闆,上标準的微量滴定闆爲8×12的96孔式。爲便於(yú)作少量标本的檢測,有制成8聯孔條或12聯孔條的,放入座架後,大小與标準ELISA闆相同。ELISA闆的特點是可以同時進行大量标本的檢測,並(bìng)可在特制的比色計上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀器用於(yú)微量滴定闆型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的标準化極爲有利。聚苯乙烯經射線照射後,其吸附性能特别是對免疫球蛋白的吸附性能增加,應用於(yú)雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用於(yú)間接法測抗體時空白值較大。

        良好的ELISA闆應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各闆之間、同一闆各孔之間、同一闆各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA闆由於(yú)原料的不同和制作工藝的差别,各種産品的質量差異很大,因此,每一批号的ELISA闆在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法爲:以一定濃度的人IgG(一般爲10ng/ml)包被ELISA闆各孔,洗滌後每孔内加入适當稀釋度的酶标抗人IgG抗體,保溫後洗滌,加底物顯色,終止酶反應後,分别測(cè)每孔溶液的吸光度。控制反應條件,使各孔讀數在吸光度0.8左右。計算全部讀數的平均值。所有單個讀數與全部讀數的均數之差,應小於(yú)10%。


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