所謂“花闆”,就是空白、陰陽性對照及室内質控孔結果正常,而标本孔的OD值卻偏高。“花闆”現象的出現,往往會給實驗者判讀(dú)結果帶(dài)來麻煩。

爲瞭避免“花闆”問題的出現,降低檢測的假陽性率,獲得更理想的實驗結果,在檢測過程中應採取下列措施:
1.在選擇ELISA試劑(jì)時,應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間(jiān)差小、操作方便、省時的試劑(jì)。
2.在所有标本進行檢測(cè)的過程中,所用的儀器及加樣過程都處於(yú)正常狀态的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結果的影響。
3.血液标本應置於(yú)室溫下1-2h,使血液凝固收縮,然後離心檢測(cè)或讓血液過夜後再檢測(cè)。這樣才能使得血液充分收縮,讓标本中的非特異性物質所緻的假陽性率降至lowest。
4.檢測(cè)之前,加大離心轉速,盡量延長(zhǎng)時間,使血細胞和纖維蛋白充分沉澱,讓血細胞與血清*分離。
5.加樣時不能加入紅(hóng)細胞或纖維蛋白,要按照操作說明書去做,否則會(huì)影響實驗結果。
6.對於(yú)血清中存在的紅細胞或纖維蛋白原,可以在加樣前離心時得到控制,同樣也可以通過适當增加洗滌次數和浸泡時間來進一步減輕或避免對實驗結果的影響。同樣,對於(yú)血液存在的非特異性的IgG,增加洗滌次數和延長(zhǎng)浸泡時間也同樣有效。
7.封闆溫育時,各孔一定要封嚴,防止陽性标本的液體蒸發,産(chǎn)生周邊(biān)現象從而導緻“花闆”的出現。
8.孵育時間過長(zhǎng),增加瞭(le)固相載體吸附非特異性蛋白的可能性,也會造成“花闆”。因此,除把握孵育時間外,在加樣過程中也應嚴格控制時間,标本較多時可分批操作。
9.手工洗闆時應注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面後(hòu)産(chǎn)生“花闆”。
10.用洗闆機洗闆時應防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗闆的過程中易産(chǎn)生拖帶(dài)現象而導緻“花闆”的出現。
11.洗液的溫度也會影響洗闆的幹(gàn)淨程度,尤其是冬天溫度過(guò)低時容易出現“花闆”問題。
12.洗液要注滿孔,孔壁洗滌(dí)不幹(gàn)淨也易造成“花闆”現象。
13.洗液要盡量新鮮配制,放置時間過長(zhǎng)易産(chǎn)生絮狀物或渾濁,造成堵孔或花闆。
14.有些廠家的試劑顯色液不穩定,使用前容易變(biàn)藍,如在實驗前不仔細檢查,很容易導緻“花闆”現象的發生,這也提醒實驗者應使用新鮮的顯色液,保證實驗的準確(què)性。
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