ELISA标準曲線是結果計算的尺子,标準品是ELISA 實驗成功與否的關鍵點。怎樣正確溶解、稀釋标準品呢?
1. 粉末标準品短暫離心,讓因運輸沾到管蓋、管壁的标準品沉到管底。
2. 根據瓶标簽加入一定體積的蒸餾水,加水後輕柔渦旋震蕩,室溫靜置溶解 10-30min,讓粉末*溶解。
注意:加水後暫不用移液槍吹吸,避免蛋白未溶解,槍頭帶出部分蛋白,待*溶解後可吹吸或渦旋振蕩混勻。
3. 标準品梯度稀釋:
(1)标準品稀釋液的選擇:
若血清、血漿(jiāng)、組織勻漿(jiāng)樣本,用試劑(jì)盒中的标準品稀釋液,梯度稀釋标準品。
若細(xì)胞上清樣本,建議用細(xì)胞培養基梯度稀釋(shì)标準品。
(2)耗材準備(bèi):準備(bèi)8個(gè)1.5Ml離心管,寫上S1-S7、空白。
(3)梯度稀釋:根據說明書,每管加入等體積(jī)的标準品稀釋液(培養基)。吸取同體積(jī)溶解好的标準品到S1管中,吹打10次混勻,渦旋5S。從(cóng)S1管中吸取同體積(jī)溶液到 S2管,吹打10次混勻,渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。
(4)空白: 标準品稀釋(shì)液(培養基)作爲空白即零濃(nóng)度。
注意:梯度稀釋标準品時,渦旋震蕩(dàng)混勻後可短暫離心,讓到蓋(gài)子、壁上的液體到管底,再開始稀釋下個濃度。
标準品溶解、梯度稀釋是ELISA實驗關鍵點(diǎn),按以上方法梯度稀釋就可,以下是我們的ELISA标準操作視頻,可供大家參(cān)考。
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